Resumen de EspecÍmenes

Resumen de Recolección y Procesamiento de Especímenes en Punto de Partida del Estudio de Hermanas

Los especímenes del Estudio de Hermanas fueron recolectados en los hogares de las participantes o en un lugar alternativo en donde ambas partes estuvieron de acuerdo, como la oficina de un médico. A las participantes se les envió un paquete de recolección para la primera orina de la mañana, las uñas de los pies y para el polvo que hubiese en sus hogares. Estas muestras, junto con la toma de medidas antropométricas y presión arterial, fueron recolectadas por examinadoras de un servicio nacional de flebotomía a domicilio.

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Recolección de Especímenes en Punto de Partida

Recolección de Sangre: A las participantes se les indicó que ayunaran por al menos ocho horas antes de que se les tomaran la muestra de sangre. La examinadora sustrajo la sangre como lo muestra el siguiente cuadro y tomó las muestras de orina y del ambiente. A cada participante se le extrajo aproximadamente 45 ml de sangre en seis tubos BD Vacutainer®, incluyendo dos tubos EDTA, dos tubos de suero y dos tubos de ACD-B.

Tapa/Color Tubo	Tipo de Tubo	Orden de Extracción	Empaquetado	Manipulacion Especial
Rojo	10 ml	(1)	Frio *	*Solo durante el tránsito a la oficina de análisis antes de procesar. Invertir
Rojo	10 ml	(2)	Frio *	*Solo durante el tránsito a la oficina de análisis antes de procesar. Invertir
Violeta	EDTA 10 ml	(3)	Ambiente	Invertir
Amarillo	ACD-B 6 ml	(4)	Ambiente	Invertir
Marrón Claro	EDTA 3 ml	(5)	Ambiente	Invertir
Amarillo	ACD-B 6 ml	(6)	Ambiente	Invertir

Recolección de Saliva: Cuando una muestra de sangre no pudo ser recolectada debido a una no-exitosa flebotomía, se le pidió a las participantes que hicieran una recolección de saliva usando un equipo de auto-recolección de saliva ADN Oragene™. Aunque esto tendrá sus limitaciones en comparación con la sangre, proveerá una fuente de ADN para análisis genético.

Recolección de Orina: La mañana de la visita de la examinadora, las participantes recolectaron aproximadamente 60 ml de su primera orina del día en un envase de recolección previamente analizado para evitar ftalatos.

Recolección de uñas de los pies: Después de remover cualquier esmalte de uñas, la participante tomo un corte de cada uña de ambos pies. La uñas del dedo gordo fueron guardadas por separado de las otras uñas en sobres dados por el estudio.

Recolección de polvo: Tres marcos de puertas de tres diferentes habitaciones del hogar fueron limpiadas buscando polvo, esto dio como resultado el tener seis hisopos sucios de tres lugares diferentes.

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Procesamiento de Especímenes en Punto de Partida

Suero y coágulo de sangre: Dos tubos con la topa roja fueron centrifugados en el lugar inmediatamente después de la recolección para poder aislar el suero de las células rojas lo antes posible. El suero fue transferido a un tubo de transporte estándar para enviarse al laboratorio. A la llegada, el suero fue almacenado en aproximadamente quince pipetas de 0.5 ml  en la fase de vapor de nitrógeno líquido del sistema de criogenia ‘CryoBioSystem™(CBS™). Un coágulo sanguíneo fue almacenado en un tubo criovial.

Plasma y sangre entera EDTA: Un tubo Vacutainer® (tope violeta) de 10.0 ml EDTA BD proporcionó sangre entera, plasma y sangre seca. Una alícuota de 1.0 ml de sangre entera fue almacenado en un criovial y dos tipos de tarjetas para sangre seca se mancharon y almacenaron (60 µl por mancha). Una fue una tarjeta tratada químicamente impregnada para lisis celular y ADN estabilizado y la otra fue una tarjeta no-tratada. El resto de la sangre entera fue centrifugada y el plasma fue aislado y almacenado en pipetas CBS™ de 0.5 ml en la fase de vapor de nitrógeno líquido. Un tubo Vacutainer® (tope marrón claro) de 3.0 ml fue almacenado en el tubo Vacutainer® original a -20°C para futuro análisis de metales, rastro de elementos y contaminante ambiental.

Sangre entera ACD-B: Uno de los tubos Vacutainer® ACD-B fue alicuotado en seis tubos crioviales de 1.0 ml y criopreservado con 10% DMSO usando un congelador programable. En un quince por ciento del tiempo, este tubo ACD-B fue seleccionado para aislamiento de linfocitos como un protocolo alternativo. La selección se basó en un algoritmo que predeterminó un grupo de alto riesgo basado en la edad para el momento de la inscripción y la edad de la hermana afectada cuando recibió el diagnóstico, más controles seleccionados aleatoriamente. El segundo tubo ACD-B fue alicuotado en un criovial de 4.5 ml y dos crioviales de 1.0 ml y almacenados en la fase de vapor de nitrógeno líquido.

Orina: Inmediatamente después de que es recibida en el laboratorio del Estudio de Hermanas, se le hace un análisis químico básico para medir proteína, creatinina, sangre, leucocitos, nitrato, glucosa, cetona, pH y la gravedad específica. La orina fue alicuotada en veinte pipetas CBS™ de 0.5 ml, cinco viales de 1.0 ml, y un vial de 3.6 ml. Las pipetas con orina fueron almacenadas en la fase de vapor de nitrógeno líquido y los viales fueron almacenados en congeladores mecánicos a -80°C.

Resumen del Almacenamiento de Especímenes por Participante del Estudio de Hermanas

Tipo de Material	Aditivo	Recipiente	Volumen	Temperatura de Almacenaje Final
Coágulo de sangre	Ninguno	Vial	1	-80C/LN
Linfocitos	ACD	Vial criopreservado	1-2 viales, ~3 millones celulas/vial	LN
Plasma	EDTA	Pipetas	9 X 0.5 ml	LN
Suero	Ninguno	Pipetas	17 X 0.5 ml	LN
Sangre entera	ACD	Vial	1 X 4.5 ml	-80C/LN
Sangre entera	ACD	Vial	2 X 1.0 ml	LN
Sangre entera	ACD	Vial criopreservado	6 X 1.0 ml	LN
Sangre entera	EDTA	Tubo vacutainer	1 X 3.0 ml	-20C
Sangre entera	EDTA	Vial	1 X 1.0 ml	-80C
Sangre entera	EDTA	Tarjeta filtro	2	Ambiente
Orina	Ninguno	Pipetas	20 X 0.5 ml	LN
Orina	Ninguno	Vial	1 X 3.6 ml	-80C
Orina	Ninguno	Vial	5 X 1.0 ml	-80C
Uñas de pies	Ninguno	Sobre	2	Ambiente
Polvo del hogar	Ninguno	Hisopos con alcohol en bolsa plástica sellada	6 hisopos	-20C

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